詳細(xì)介紹
Sino Biological SMM293-T1培養(yǎng)基,HEK293細(xì)胞培養(yǎng)基
產(chǎn)品描述:
SMM 293-TI培養(yǎng)基適用于貼壁、懸浮培養(yǎng)條件下的HEK293家族的HEK293EBNA及相關(guān)的細(xì)胞（如HEK293-F、HEK293H 、HEK293T、HEK293S、HEK293FT）的長(zhǎng)期生長(zhǎng)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
SMM 293-TI含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的全部營(yíng)養(yǎng)成份，無需添加任何添加物即可使用。其化學(xué)成分明確，主要包含細(xì)胞生長(zhǎng)所需的無機(jī)鹽， HEPES， 碳酸氫鈉， 必需和非必需氨基酸， 維生素， 酚紅， 微量元素， PluronicÒ F-68和其他無機(jī)物（注意：此培養(yǎng)基不包含抗生素以及血清）。 |
Sino Biological SMM293-T1培養(yǎng)基,HEK293細(xì)胞培養(yǎng)基
產(chǎn)品特點(diǎn):
| • HEK293細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基 | • 即用型*培養(yǎng)基，不用添加其他組分 |
| • 培養(yǎng)基批次間性能穩(wěn)定，同類產(chǎn)品性能更* | • 無動(dòng)物源組分，無血清，化學(xué)成分明確 |
| • 轉(zhuǎn)染前后無需更換培養(yǎng)基 | • 上千蛋白表達(dá)成功案例 |
| • 適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定株轉(zhuǎn)染以及培養(yǎng) | • 適用于細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)和大規(guī)模的反應(yīng)器培養(yǎng) |
SMM293-T1培養(yǎng)基,HEK293細(xì)胞培養(yǎng)基
產(chǎn)品參數(shù):
| 外觀 | 澄清紅色溶液 | 適用細(xì)胞株 | HEK293EBNA及相關(guān)的細(xì)胞（如HEK293F、HEK293T、HEK293H 、HEK293S、HEK293FT） | | 滲透壓 | 275±10 mOsm/kg | 細(xì)胞接種密度 | 0.3-0.6×106 cells/mL | | pH值 | 6.0–6.5 | 倍增時(shí)間 | < 26 hrs（因細(xì)胞類型、狀態(tài)影響而存在數(shù)值變化） | | 無菌檢測(cè) | 無菌 | 細(xì)胞培養(yǎng)評(píng)價(jià) | 優(yōu)良 | | 內(nèi)毒素 | < 10 EU/mL | 產(chǎn)品用途 | 僅用于科學(xué)研究，不推薦用于人類或動(dòng)物的診斷和治療 | | 有效期 | 6個(gè)月 | 儲(chǔ)存條件 | 2-8 ℃，避光 |
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| SMM 293-TI培養(yǎng)基為澄清紅色透明液體，2~8℃避光保存，如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得渾濁或出現(xiàn)沉淀，請(qǐng)勿使用。 |
產(chǎn)品使用效果:
| 細(xì)胞密度高 |
| SMM 293-TI培養(yǎng)基在HEK293T 的培養(yǎng)上更具優(yōu)勢(shì)。下圖從細(xì)胞生長(zhǎng)曲線以及細(xì)胞活率兩個(gè)方面，展示了四種培養(yǎng)基對(duì)HEK293T細(xì)胞的培養(yǎng)效果，SMM 293-TI培養(yǎng)基明顯具有不亞于國(guó)外的質(zhì)量。 |
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| 成功表達(dá)多種重組蛋白質(zhì) |
| SMM 293-TI 成功應(yīng)用于多種重組蛋白質(zhì)的表達(dá)生產(chǎn)，獲得上千個(gè)高品質(zhì)的蛋白質(zhì)產(chǎn)品。其中一種Fc標(biāo)簽融合蛋白的產(chǎn)量高達(dá)2.5g/L。 |
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產(chǎn)品使用方法:
| 細(xì)胞復(fù)蘇： |
- 迅速取出凍存的細(xì)胞，在37 ℃水浴條件下進(jìn)行解凍（可以在水中輕輕晃動(dòng)，時(shí)間控制在30s以內(nèi)）；
- 輕輕地混勻細(xì)胞并將融化的細(xì)胞全部移至50 mL無菌離心管中，逐滴加入10 mL預(yù)熱到37℃的培養(yǎng)基，離心換液（100 g，3 min）去除全部上清，加入293新鮮培養(yǎng)基重懸，使得細(xì)胞密度達(dá)到0.4~0.6×106cells/mL；
- 將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110~175rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；
- 2-5天后通過人工或儀器測(cè)定細(xì)胞的密度以及活率，如果細(xì)胞密度達(dá)到1.0×106cells/mL，活率85%以上則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；
- 如果細(xì)胞密度低于1.0×106cells/mL，則建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心（100g，5min），然后重懸于20-30mL 的新鮮培養(yǎng)基中使得細(xì)胞密度為0.6×106cells/mL 左右，并繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞正常生長(zhǎng)則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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| 細(xì)胞轉(zhuǎn)染： |
| 在SMM 293-TI培養(yǎng)基中，用Sinofection®轉(zhuǎn)染試劑（貨號(hào)STF01），可以實(shí)現(xiàn) HEK293 細(xì)胞的高轉(zhuǎn)染效率。具體細(xì)節(jié)可以參考Sinofection® 轉(zhuǎn)染試劑說明書。 |
| 細(xì)胞馴化： |
| 懸浮的HEK293 cells幾乎不用馴化就可直接適應(yīng)SMM 293-TI培養(yǎng)基。如果直接更換培養(yǎng)基失敗則推薦下面兩種方式來馴化HEK293細(xì)胞使其適應(yīng)SMM 293-TI培養(yǎng)基：1）直接馴化；2）逐步馴化。 |
| 1）直接馴化： |
- 將培養(yǎng)在加有5~10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基里的細(xì)胞，直接稀釋傳代到SMM 293-TI培養(yǎng)基中，細(xì)胞密度控制在0.3~0.4×106cells/mL；
- 將細(xì)胞置于37 ℃，5% CO2，轉(zhuǎn)速為110~175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；
- 4~6天后對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋（或者離心更換上清），保持稀釋（或者離心）后細(xì)胞密度為0.3~0.4×106cells/mL；
- 經(jīng)過在100%的 SMM 293-TI培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后4~6天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2~3×106cells/mL，細(xì)胞活率大于90%。這說明細(xì)胞已經(jīng)*適應(yīng)了SMM 293-TI培養(yǎng)基，之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到0.2~0.3×106/ml左右。
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| 注意:如果直接馴化效果欠佳，可采用逐步馴化的方法。 |
| 2）逐步馴化： |
- 將培養(yǎng)在加有5~10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基里的細(xì)胞，直接稀釋傳代到SMM 293-TI培養(yǎng)基中，細(xì)胞密度控制在0.3~0.4×106cells/mL，原培養(yǎng)基與SMM 293-TI培養(yǎng)基的比例為75:25；
- 將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；
- 4~6天后進(jìn)行傳代，如果細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且活率>90% 則傳代時(shí)原培養(yǎng)基與SMM 293-TI培養(yǎng)基的比例為50:50，細(xì)胞密度仍控制在0.3~0.4×106cells/mL。如細(xì)胞生長(zhǎng)慢，可離心上清，留20%原培養(yǎng)基，加入80% 的新鮮SMM 293-TI培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；
- 重復(fù)步驟3逐步增加SMM 293-TI培養(yǎng)基所占的比例（原培養(yǎng)基與SMM 293-TI培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90）直到100%的SMM 293-TI培養(yǎng)基；
- 經(jīng)過在100%的 SMM 293-TI培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后4~6天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2~3×106cells/mL，細(xì)胞活率大于90%。這說明細(xì)胞已經(jīng)*適應(yīng)了SMM 293-TI培養(yǎng)基，之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到0.2~0.3×106cells/mL。
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